2023年7月6日 · ssODN ：寡核苷酸（single-stranded oligonucleotides） ssODNs包含一个24nt长的非同源中心区域， 以取代guide RNA ( gRNA ) 靶向的基因组DNA序列 ，同时在FKB12的3个阅读框中引入终止密码子，其两侧有短的 (<75 nt)同源序列。

2019年9月27日 · 本文将为大家介绍为什么单链供体模板（Single-stranded donor oligonucleotides, ssODN ）在 CRISPR 介导的同源重组（Homology directed repair, HDR）表现更优，以及如何设计最佳的 HDR 模板。 CRISPR-Cas9 通过使各种模式生物的基因组发生有效的位点特异性变化的方式来彻底改变基因组研究。 在 Cas9 蛋白使 DNA 发生双链断裂（Double-strand break, DSB）后，哺乳动物细胞能利用内源性 DNA 修复机制将断裂端连接在一起。 细胞修复断裂有 …

短片段的敲入（如Tag标签等）可以使用ssODN。 长片段的敲入则需要dsDNA质粒作为修复模板，需要注意的是敲入的片段不能过长，一般不超过5 kb（包含抗性和荧光筛选），过长会降低重组效率。

2016年1月20日 · Here we show efficient gene KI in rats by combining CRISPR-Cas with single-stranded oligodeoxynucleotides (ssODNs). First, a 1-kb ssODN co-injected with guide RNA (gRNA) and Cas9 messenger RNA...

金斯瑞推出序列正确、纯度高的GenExact™ ssDNA（single-stranded DNA，ssDNA或single-stranded oligonucleotides，ssODN）合成服务，是CRISPR实验中基因插入、置换和修正时，作为同源重组修复（homology directed repair，HDR）模板的理想选择，显著提升基因编辑效率和准确 …

4. Design the ssODN. The ssODN is comprised of three parts: two homology arms sandwiching the region to be edited. a. The 5' homology arm (HA): this homology arm will encompass the ~50 nt upstream of the Cas9 cleavage site. The Cas9 cleavage site is 3 nt upstream of the PAM site (see diagram below). b.

2018年7月4日 · 近期的研究证明单链寡核苷酸（ssODN）在包含较短同源臂的情况下可产生比 dsDNA 更高的 HDR 效率。 做为全球领先的核酸合成厂商 [6-7]，IDT 可定制合成长度为 200~2000 个碱基的 ssDNA。 这些高保真的 ssDNA 均经过测序验证，适用于 HDR [8]。 表 1. IDT 单链合成产品类别. （点击查看大图） 表 1 中， Ultramer®采取 IDT 领先行业耦合技术，可以化学方法生产长达 200 碱基单链 DNA（图 3. A）。 每条 Ultramer 序列都会通过电喷雾电离质谱技 …

2016年1月20日 · Here we show efficient gene KI in rats by combining CRISPR-Cas with single-stranded oligodeoxynucleotides (ssODNs). First, a 1-kb ssODN co-injected with guide RNA (gRNA) and Cas9 messenger RNA produce GFP-KI at the rat Thy1 locus.

2021年11月19日 · Single-stranded oligodeoxynucleotides (ssODNs) are widely used as DNA repair templates in CRISPR/Cas precision genome editing. However, the underlying mechanisms of...

2024年4月19日 · 制备基因敲除模板ssODN的方法. 前言：Knock In策略，是在CRISPR/Cas9的sgRNA切割位点造成了DSB，然后通过提供DNA修复模板，引入特定的突变。普遍报道ssDNA比dsDNA效果要好，合成ssODN的方法大致由以下几类： 如果经费充足，直接生物公司合成，长度在200左右都不是问题。